超微量光度法的應用:
定義: 超微量分光光度法是利用物質所*的吸收光譜來鑒別物質或測定其含量的分析檢測技術。
特點: 靈敏、快速和簡便,在復雜組分系統中,不需要分離,即能檢測出其中所含的極少量物質。
應用: 生物化學研究中廣泛使用的方法之一,廣泛用于糖,蛋白質,核酸,酶等的快速定量檢測
超微量分光光度計的光譜范圍
包括波長范圍為380~780 nm的可見光區和波長范圍為200~380 nm的紫外光區。不同的光源都有其*的發射光譜,因此可采用不同的發光體作為儀器的光源。
鎢燈的發射光譜:鎢燈光源所發出的380~820nm波長的光譜,光通過三棱鏡折射后,可得到由紅、橙、黃、綠、藍、靛、紫組成的連續色譜;該色譜可作為可見光分光光度計的光源。
氘燈的發射光譜:氘燈能發出190~400 nm波長的光譜,可作為紫外光光度計的光源。 氙氣閃光燈的發射光譜:氙燈能發出200~850 nm波長的光譜,可作為紫外-可見光光度計的光源。電源體積較小,采用脈沖閃光方式工作,閃光次數可達109次,壽命相對氘燈和鎢燈較長。
物質的吸收光譜
如果在光源和棱鏡之間放上某種物質的溶液,此時在屏上所顯示的光譜已不再是光源的光譜,它出現了幾條暗線,即光源發射光譜中某些波長的光因溶液吸收而消失,這種被溶液吸收后的光譜稱為該溶液的吸收光譜。
不同物質的吸收光譜是不同的。因此根據吸收光譜,可以鑒別溶液中所含的物質。
原理
當光線通過某種物質的溶液時,透過的光的強度減弱。因為有一部分光在溶液的表面反射或分散,一部分光被組成此溶液的物質所吸收,只有一部分光可透過溶液。
入射光 = 反射光 + 分散光 + 吸收光 + 透過光
如果我們用蒸餾水(或組成此溶液的溶劑)作為“空白"去校正反射、分散等因素造成的入射光的損失,則:
入射光 = 吸收光 十 透過光
分光光度計進行樣品濃度測定的原理是根據朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律,
A = ε b c
其中,A ——為物質的吸光度;
ε——為物質的吸光系數;
b——為光路長度(光程);
c——為物質的濃度。